细胞突然出现空泡，会不会细胞老化的特征？
答：有参考表明细胞空泡化被认为是细胞衰老过程中可能出现的形态学变化之一；也有资料指出，空泡化可能由多种因素引起，如感染或代谢障碍，并非衰老所特有；标题是《Cellular Senescence in Health, Disease, and Lens Aging》，提供关于衰老细胞形态学变化的详细描述，细胞空泡可以是细胞衰老的一个标志，但并非绝对，有部分细胞会在培养的过程中一直会有微量的空泡产生。

细胞空泡和日常培养的那些行为有直接的关系?
答：1.消化过度，会导致细胞膜破裂，培养基渗透呈现空泡化。
2.药物实验过程中，药物的浓度过高。
3.细胞支原体或者黑胶虫感染后期。

怎么预防细胞空泡？
一、低代次开局
原代细胞≤3代以内做实验；常见细胞系≤10代；一拿到新细胞立刻做“代次地图”，记录复苏日期与传代次数，超过警戒线（如 80 % 极限代次）直接报废。

二、血清与培养基“三查三确认”
1.查批号：每批FBS到货做48h空培测试，观察是否自发空泡。
2.查理化：pH7.0–7.2、渗透压280–300mOsm/kg；每次换液随手测一次，偏差>5 % 立即停用以避免低渗性空泡。
3.查效期：不开封4 ℃避光保存≤1个月；开封后2周内用完。

启达生物FBS胎牛血清：

1.多批次筛选，以确保生长因子含量、内毒素水平和蛋白质浓度等关键参数的一致性。

2.多种细胞培养测试，确保实验之间的一致性。

三、换液节奏
2–3day全换液一次；细胞密度≥80%即传代，不让代谢废物堆积到“发黄”程度，可显著减少饥饿性自噬空泡

四、传代—把“物理损伤”降到最低
尽量在细胞密度达到85%左右进行消化传代，消化时，先用PBS清洗细胞，以完全去除细胞瓶的旧培养基，消化起来事半功倍，在操作不熟悉的细胞的时候，选择超净台常温消化，每消化2分钟左右显微镜下观察，当细胞变得椭圆透亮后，轻拍细胞瓶，细胞脱落。加含有血清的完全培养基终止消化 ，严禁用力吹打，可用吸管沿瓶壁缓流，200×g3–5min；弃上清时留1–2 mm液面，避免倒吸造成气泡；气泡进入细胞沉淀是“人工空泡”最常见来源之一，使用专用冻存液冻存即可，正常1ml的冻存液冻存50万-100万的细胞量，复苏37 ℃水浴90s内完成，随后10倍稀释慢降DMSO浓度，减少渗透冲击空泡。

免程序降温细胞冻存液( 无血清/蛋白)：1.它采用氨基酸和维生素替代了血清和蛋白组分，研究发现，IPS或者其他多能干细胞，血液细胞等在含有FBS的环境下长期冻存，复苏后会出现分化现象，因此在这类细胞的冻存中，我们都建议使用无血清无蛋白组分的冻存液，以维持细胞在休眠时的营养所需。

2.它也无需程序降温，冻存后直接放-80°过夜 ，在-80°冰箱细胞可保存1-2个月。

3.适用于限制血清干扰的细胞冻存。

五、污染防控——把“隐形杀手”挡在门外
1.支原体
每月一次PCR或Hoechst荧光筛查；发现阳性立即丢弃，连带同一孵箱内所有培养物；支原体晚期必伴空泡化，早筛可 100 % 预防 。

2.化学污染
水浴锅、水盘每两周换0.1% 硫代硫酸钠或专用抑菌剂；培养瓶内出现“彩虹膜”立即停用，该膜多为脂溶性化学物析出，可诱导溶酶体空泡。

1000X支原体清除剂：
1. 采用抗支原体多肽合成剂配制，未发现细胞毒性作用，且治疗简单，可治愈99%以上的细胞支原体感染。

2. 灵活多用 ，稀释1000倍加入细胞培养两代可清除支原体 ，稀释2000倍可预防细胞支原体感染。